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    為您講解流式細胞儀調試和校準

    2020-06-22作者:瀏覽次數:319
            要想很好地應用流式細胞分析和分選技術,必需先對流式細胞儀進行調試,使其處于良好的工作狀態,并能正確使用儀器。
    流式細胞儀調試和校準
    流式細胞儀調試和校準:
            流式細胞儀在使用前,甚至在使用過程中都要精心進行調試,以保證工作的可靠性和最佳性。調試的項目主要是激光強度、液流速度和測量區的光路等。
            激光強度:除調整反射鏡的角度以調整到所需 波長的激光出光外,還要結合顯示屏上的光譜 曲線使激光的強度輸出為最大。
            液流速度:可通過操作臺數字顯示監督,調節?氣體壓力大小以獲得穩定的液流速度。
            測量區光路調節?:這是調試工作的關鍵。需要保證在測量區的液流、激光束、90散射測量光電系統垂直正交,而且交點較小。一般可在用標準熒光微球等校準中完成。
            流式細胞術中所測得的量是相對值,因此需要在使用前或使用中對系統進行校準或標定,這樣才能通過相對測量獲得絕對的意義。因而FCM中的校準具有雙重功能:儀器的準直調整和定量標度。 標準樣品應該穩定,有形成份形狀應是大小比較一致球形,樣品分散性能良好,且經濟、容易獲得。常用標準熒光微球作為非生物學標準樣品,雞血 紅細胞做為生物學標準樣品。微球用 樹脂材料制作,或標有 熒光素,或不標記熒光素。所用的雞血 紅細胞標準樣品制作過程昭下:取3.8%枸櫞酸或肝素抗凝的雞血( 抗凝劑:雞血=1:4),經PBS清洗3次,再用5~10ml的1.0% 戊二醛與清洗后的雞紅細胞混合,室溫下振蕩醛化24h,最后經PBS再清洗,貯4℃冰箱中備用。需要指出的是因為未經熒光染色,所測光信號為雞 血紅蛋白的自發熒光。


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